酶標儀，即酶聯免疫檢測儀器，是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器，又稱微孔板檢測器。酶標儀驗證是確保其性能符合使用要求的重要步驟，主要包括以下方面：

一、酶標儀的基本原理

酶標儀主要由光路系統與信號采集系統組成。光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光，該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上。光電檢測器將光信號轉換成相應的電信號，經過一系列信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算，最后顯示結果。

二、酶標儀的分類

1. 按自動化程度分類：酶標儀在使用過程中分為半自動和全自動兩種，但工作原理基本一致。

2. 按濾光方式分類：酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內的任意波長；而濾光片型酶標儀則根據選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。

3. 按功能分類：酶標儀可以分為單功能酶標儀（分為光吸收、熒光、化學發光等）和多功能酶標儀。多功能酶標儀是兩種或更多檢測模塊的集成，通常情況下至少可提供光吸收、熒光這兩種最常見檢測功能，而一些中GD多功能酶標儀還可支持化學發光、時間分辨熒光、熒光偏振、生物發光共振能量轉移，甚至還可以支持“Western Blot"和“上轉換發光"等檢測。

三、酶標儀的驗證內容

1. 安裝確認：主要進行文件確認、安裝環境的確認等。

2. 運行確認：主要進行功能確認（軟件和硬件）、示值讀數測試。

3. 性能確認：主要進行波長、吸光度、發光測試等。

四、酶標儀性能評價與鑒定方法

1. 濾光片波長精度檢查及其峰值測定：用高精度紫外可見分光光度計（波長精度±0.3nm）對不同波長的濾光片進行光譜掃描，檢測值與標定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質量越好，波長精度越高。

2. 靈敏度和準確度的監測：

• 靈敏度：精確配制6ug/ml重鉻酸鉀（干燥）溶液（0.05mol/L硫酸溶解），加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mol/L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長650nm）測定，其吸光度應≥0.01A。

• 準確度：準確配制1mmol/L對硝基苯酚（提純品）水溶液，然后以10mmol/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmol/L NaOH溶液作空白，于405nm（參比波長650nm）檢測，其吸光度應在0.4A（0.395~0.408A）左右。

• 通道差與孔間差檢測：

• 通道差檢測：取一只酶標板小孔杯（杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染）以酶標板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200uL后置于8個通道的相應位置，蒸餾水調零，采用雙波長（測定波長490nm，參比波長630nm或650nm）連續測三次，觀察其不同通道之間測量結果的一致性，可用極差值來表示其通道差。

• 孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調至0.065~0.070A）先后置于同一通道，蒸餾水調零，采用雙波長檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。

• 零點飄移：取八只小孔杯，分別置于八個通道的相應位置，均加入200ul蒸餾水并調零，采用雙波長或單波長（490nm）每隔30min測定一次，觀察8個通道4h內的吸光度變化。零點飄移是評價儀器在一定時間內零點吸光度的變化趨勢，與波長無關，它間接地反映了儀器內部檢測系統在單位時間內處于工作狀態下的穩定性及儀器的機械性能情況。

• 精密度評價：每個通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調零，采用雙波長作雙份平行測定，每日測定兩次，連續測定20天。分別計算其批內精密度、日內批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的CV值。

綜上所述，酶標儀驗證是一個復雜而細致的過程，涉及多個方面的測試和評估。通過嚴格的驗證步驟和方法，可以確保酶標儀的性能穩定可靠，為科研和臨床檢測提供準確的數據支持。

酶標儀廣泛應用于臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學等領域。以下是選擇適合自己的酶標儀時需要考慮的因素：

1. 外觀與空間適應性：

• 酶標儀的體積不宜過大，以適應檢驗室有限的空間，避免占據過多空間，給其他工作帶來不便。

• 外形美觀、小巧的機型更受歡迎。

• 酶標儀外殼應易于消毒和清潔，以適應檢驗過程中經常會有樣品液體外濺的情況。

• 操作便捷性：

• 儀器操作應簡便，對于國產酶標儀，菜單最好使用中文顯示，以方便檢驗人員理解和操作。

• 儀器上應有明確的儀器名稱、型號、編號、生產廠家、出廠日期和電源電壓等信息。

• 各調節旋鈕、按鍵和開關應能正常工作，外表面無明顯機械損傷。

• 顯示文字應清楚完整。

• 技術性能：

• 酶標儀應能容納更多的信息，以便于法律評判和醫療糾紛處理。

• 需要了解酶標儀的穩定性（漂移）、吸光度測定的準確度、重復性、線性以及測定速度等關鍵技術指標。

• 吸光度測定范圍應滿足實驗需求，一般在0~2.5之間即可滿足ELISA的測定要求，但現在已有更高范圍的酶標儀，可根據實驗需求選擇。

• 比色與打印速度：

• 對于標本量較大的醫院或實驗室，應選擇能夠快速進行比色和打印的酶標儀，以節省檢測人員的時間和確保檢驗結果的準確性。

• 附加功能：

• 根據實驗需求，可選擇具有震板功能、溫育功能、軟件功能等附加功能的酶標儀。震板功能有助于在比色測定前振蕩混勻ELISA板孔內的顏色；溫育功能則可使ELISA測定中的微孔板條在儀器內部完成溫育過程；軟件功能則提供了對ELISA定性和定量測定及其他測定方式的統計分析并報告結果的功能。

綜上所述，選擇適合自己的酶標儀需要考慮多個因素，包括外觀與空間適應性、操作便捷性、技術性能、比色與打印速度、品牌與售后服務以及附加功能等。建議根據實驗需求和實驗室條件進行綜合考慮，選擇性價比高的酶標儀。